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PCR實驗室核酸檢測常見六大問題

時間 : 2022-06-01 16:30:02 閱讀 : 86

①新冠試劑出現(xiàn)翹尾,怎么處理?

答:如果是個別單一通道翹尾,不管是FAM還是VIC通道,首先按照要求復查,復查建議重新采樣,如果不方便重新采樣建議對原有樣本進行重新提取核酸驗證,如果復查陰性判讀陰性,如果復查還是同一通道翹尾,就要對結果仔細審核,一是要排除實驗室污染,二是要對病人信息了解清楚,從臨床癥狀及接觸史排查,如果沒法確認,建議必須重新采樣復查,如有必要可以采用另一家試劑來驗證。如果出現(xiàn)大量的弱陽性擴增翹尾,首要原因是考慮實驗室污染,可以通過做環(huán)境樣本和陰性對照做驗證排除。


②N基因和1ab基因是新冠病毒的特有基因嗎,靈敏度哪個更高?是否會和其他冠狀病毒片段重疊?

答:N基因跟1ab都是特異的,不會跟其他呼吸道病原體交叉反應。設計時候,兩個基因的序列不一樣,導致靈敏度不一樣,N基因的靈敏度比1ab靈敏度高。


③新冠檢測結果和臨床診斷不符合,怎么解讀?

答:新冠病毒由于是RNA病毒,容易降解,另外檢測結果也和取樣,核酸提取以及樣本本身的核酸濃度有關,需要逐一分析,同時可以結合臨床癥狀判讀。


④采用生理鹽水做陰性對照,內標也會增長,怎么解釋?

答:因為試劑采用的是內源性內標,內源性內標是用人源基因標記,此基因存在于人的表皮細胞內,操作過程中就可能會出現(xiàn)人源性的污染,另外環(huán)境污染也有可能導致內標增長,這也是前面提到的建議做環(huán)境樣本質控。


⑤新冠樣本內標不出如何處理?

答:如果新冠樣本內標不出,該樣本必須復查,可重新混勻該樣本提取核酸,如果重新提取該樣本內標還是不出,在排除提取問題的情況下,說明采樣不合格,要通知臨床重新采樣復查。


⑥采集環(huán)境樣本檢測新冠狀病毒,為啥大部分樣本內標不出,偶爾個別樣本檢測出內標?

答:因為新冠試劑檢測的是人內源性內標,環(huán)境樣本一般不含有人源細胞,所以檢測不出內標;偶爾檢出內標,可能該環(huán)境樣本上有人源性細胞粘附,故而檢出內標。


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標題:PCR實驗室核酸檢測常見六大問題
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